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Resumen
La producción de proteínas por parte de los ribosomas es fundamental para la vida y se requiere un ensamblaje adecuado del ribosoma para la producción de proteínas. El ARN, que se modifica postranscripcionalmente, proporciona la plataforma para el ensamblaje de ribosomas. Por lo tanto, una comprensión completa del ensamblaje de ribosomas requiere la determinación de las modificaciones postranscripcionales del ARN en todos los intermediarios del ensamblaje de ribosomas y en cada vía. Hay 26 modificaciones postranscripcionales de ARN en el ARN 23S de la subunidad ribosomal grande madura de Escherichia coli (E. coli). Los niveles de estas modificaciones se han investigado exhaustivamente sólo para un pequeño número de subunidades intermedias grandes y en un número limitado de condiciones celulares y ambientales. En este estudio, determinamos el nivel de incorporaciones de 2-metil adenosina, 3-metil pseudouridina, 5-hidroxicitosina y siete pseudouridinas en un ensamblaje intermedio de subunidades grandes de E. coli en etapa temprana con un coeficiente de sedimentación de 27S. El intermedio 27S es uno de los tres intermedios de subunidades grandes acumulados en células de E. coli que carecen de la ARN helicasa DEAD-box DbpA y que expresan la mutante R331A DbpA inactiva de helicasa. La mayoría de las modificaciones investigadas se incorporan en la subunidad grande 27S a niveles intermedios similares a los de la subunidad grande 50S madura, lo que indica que estas modificaciones tempranas o las enzimas que las incorporan desempeñan funciones importantes en los eventos iniciales del ensamblaje de ribosomas de la subunidad grande
La producción de proteínas por parte de los ribosomas es fundamental para la vida y se requiere un ensamblaje adecuado del ribosoma para la producción de proteínas. El ARN, que se modifica postranscripcionalmente, proporciona la plataforma para el ensamblaje de ribosomas. Por lo tanto, una comprensión completa del ensamblaje de ribosomas requiere la determinación de las modificaciones postranscripcionales del ARN en todos los intermediarios del ensamblaje de ribosomas y en cada vía. Hay 26 modificaciones postranscripcionales de ARN en el ARN 23S de la subunidad ribosomal grande madura de Escherichia coli (E. coli). Los niveles de estas modificaciones se han investigado exhaustivamente sólo para un pequeño número de subunidades intermedias grandes y en un número limitado de condiciones celulares y ambientales. En este estudio, determinamos el nivel de incorporaciones de 2-metil adenosina, 3-metil pseudouridina, 5-hidroxicitosina y siete pseudouridinas en un ensamblaje intermedio de subunidades grandes de E. coli en etapa temprana con un coeficiente de sedimentación de 27S. El intermedio 27S es uno de los tres intermedios de subunidades grandes acumulados en células de E. coli que carecen de la ARN helicasa DEAD-box DbpA y que expresan la mutante R331A DbpA inactiva de helicasa. La mayoría de las modificaciones investigadas se incorporan en la subunidad grande 27S a niveles intermedios similares a los de la subunidad grande 50S madura, lo que indica que estas modificaciones tempranas o las enzimas que las incorporan desempeñan funciones importantes en los eventos iniciales del ensamblaje de ribosomas de la subunidad grande
